apoC-IV Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418944

Panoramica

Apoc4 codifica l’apolipoproteina C-IV (apoC-IV), un’apolipoproteina secreta principalmente associata alle particelle lipoproteiche circolanti e coinvolta nel trasporto e nel rimodellamento dei lipidi. Nel topo, apoC-IV è collegata alla regolazione del metabolismo delle lipoproteine ricche di trigliceridi e interagisce con vie che controllano l’attività della lipoproteina lipasi, la gestione epatica dei lipidi e lo scambio lipidico tra le frazioni VLDL/IDL/HDL. Le variazioni nella composizione delle apolipoproteine possono influenzare indirettamente il bilancio energetico sistemico e la segnalazione infiammatoria attraverso un flusso lipidico alterato e mediatori derivati dai lipidi. Di conseguenza, Apoc4 è rilevante per studi sui meccanismi della dislipidemia, sui fenotipi cardiometabolici e sull’omeostasi lipidica a predominanza epatica in contesti fisiologici e in modelli di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO apoC-IV (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Apoc4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Apoc4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Apoc4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina apoC-IV.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Apoc4 per lo studio della segnalazione di apoC-IV, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Apoc4 critici per la funzione di apoC-IV
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Apoc4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal apoC-IV CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal apoC-IV CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Apoc4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal apoC-IV Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR apoC-IV (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Apoc4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Apoc4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.