AP1GBP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-411596

Descripción general

SYNRG codifica AP1GBP1 (sinergina gamma), una proteína asociada a adaptadores implicada en el tráfico mediado por clatrina y en la clasificación de carga entre la red trans-Golgi y los compartimentos endosómicos. AP1GBP1 interactúa con el complejo adaptador AP-1 y contribuye al ensamblaje del recubrimiento vesicular, a la curvatura de la membrana y a la regulación espacial de las señales de clasificación que controlan la localización de las proteínas. A través de estas funciones, SYNRG mantiene la homeostasis de las vías secretora y endocítica, influyendo en el reciclaje de receptores, el direccionamiento a lisosomas y la identidad de los compartimentos. El tráfico intracelular desregulado es una característica recurrente de procesos del neurodesarrollo y neurodegenerativos, así como de la reprogramación de la señalización oncogénica, lo que convierte a SYNRG en un nodo útil para estudios mecanísticos del transporte proteico dependiente de vías.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO AP1GBP1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SYNRG en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SYNRG junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SYNRG tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína AP1GBP1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SYNRG para la investigación de la señalización de AP1GBP1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SYNRG críticos para la función de AP1GBP1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SYNRG para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido AP1GBP1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido AP1GBP1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SYNRG. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR AP1GBP1 (h) y el plásmido HDR AP1GBP1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SYNRG para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SYNRG definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.