AP1GBP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-411596

Panoramica

SYNRG codifica AP1GBP1 (synergin gamma), una proteina associata agli adattatori implicata nel traffico mediato dalla clatrina e nello smistamento del carico tra la rete trans-Golgi e i compartimenti endosomiali. AP1GBP1 interagisce con il complesso adattatore AP-1 e contribuisce all’assemblaggio del rivestimento delle vescicole, alla curvatura di membrana e alla regolazione spaziale dei segnali di sorting che controllano la localizzazione delle proteine. Attraverso queste funzioni, SYNRG sostiene l’omeostasi delle vie secretoria ed endocitica, influenzando il riciclo dei recettori, il targeting lisosomiale e l’identità dei compartimenti. Un traffico intracellulare deregolato è una caratteristica ricorrente dei processi di neurosviluppo e neurodegenerazione, nonché del rimodellamento della segnalazione oncogenica, rendendo SYNRG un nodo utile per studi meccanicistici sul trasporto proteico dipendente dalle vie cellulari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AP1GBP1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SYNRG in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SYNRG insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SYNRG a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AP1GBP1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SYNRG per lo studio della segnalazione di AP1GBP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SYNRG critici per la funzione di AP1GBP1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SYNRG per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AP1GBP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal AP1GBP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SYNRG. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AP1GBP1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR AP1GBP1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SYNRG per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SYNRG definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.