Ankyrin-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419108

Descripción general

Ank1 codifica la anquirina-1, un adaptador de membrana que conecta proteínas integrales de la membrana con el citoesqueleto subyacente de espectrina–actina, contribuyendo a la estabilidad mecánica celular y a la organización de los dominios de membrana. En células eritroides de ratón, la anquirina-1 es un componente clave del esqueleto de membrana del glóbulo rojo, coordinando interacciones entre la banda 3, la espectrina y complejos asociados que influyen en la deformabilidad de la membrana y la homeostasis iónica. La alteración de Ank1 perturba el anclaje del citoesqueleto y puede modificar la morfología de los eritrocitos, proporcionando un modelo manejable para estudiar fenotipos similares a la anemia hemolítica y principios más generales del acoplamiento membrana–citoesqueleto. La función de la anquirina-1 también es relevante para investigaciones sobre el tráfico de proteínas y la señalización compartimentalizada en la membrana plasmática.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Ankyrin-1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ank1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ank1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ank1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Ankyrin-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ank1 para la investigación de la señalización de Ankyrin-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ank1 críticos para la función de Ankyrin-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ank1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Ankyrin-1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Ankyrin-1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ank1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Ankyrin-1 (m) y el plásmido HDR Ankyrin-1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ank1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ank1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.