Angptl4 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401369-LAC

L’ANGPTL4 umano (Angptl4) codifica una glicoproteina secreta di tipo angiopoietin-like che modula il metabolismo dei lipidi inibendo la lipoproteina lipasi e regolando la clearance delle lipoproteine ricche di trigliceridi. La sua espressione è indotta da segnali metabolici e dalla segnalazione mediata da recettori nucleari, incluse le vie PPAR, collegando lo stato nutrizionale alla lipolisi del tessuto adiposo, all’assorbimento degli acidi grassi e all’omeostasi energetica. ANGPTL4 influenza anche il rimodellamento vascolare e della matrice extracellulare, alterando le proprietà della barriera endoteliale e le risposte tissutali a ipossia e infiammazione. Un’attività di ANGPTL4 deregolata è stata associata a fenotipi cardiometabolici come dislipidemia e insulino-resistenza, ed è frequentemente studiata nel contesto dell’adattamento del microambiente tumorale, di processi legati all’angiogenesi e di caratteristiche metastatiche.

Le particelle di attivazione lentivirale Angptl4 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ANGPTL4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Angptl4 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ANGPTL4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Angptl4. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ANGPTL4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.