Plásmido CRISPR de Activación (h) Angptl3: sc-402932-ACT

ANGPTL3 codifica la angiopoyetina‑like 3, una glucoproteína secretada producida predominantemente por los hepatocitos que regula la homeostasis sistémica de lípidos y energía. Angptl3 inhibe la lipoproteína lipasa y la lipasa endotelial, modulando el procesamiento de lipoproteínas ricas en triglicéridos y la remodelación de HDL, y se integra en redes de señalización metabólica que influyen en el flujo de ácidos grasos y el aclaramiento de lipoproteínas. La actividad alterada de ANGPTL3 se asocia con fenotipos de dislipidemia y riesgo cardiometabólico, lo que la convierte en un nodo clave para estudiar los programas de secreción hepática y el manejo de lípidos en tejidos periféricos. Como factor circulante, Angptl3 también proporciona una lectura accesible para vincular la regulación transcripcional con cambios medibles en las vías del metabolismo lipídico.

Angptl3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ANGPTL3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Angptl3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ANGPTL3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ANGPTL3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Angptl3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ANGPTL3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Angptl3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Angptl3 en células tumorales con expresión de ANGPTL3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.