Angptl2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-424003-ACT

Angptl2 (Angiopoietin-like 2) ist ein sezerniertes Glykoprotein, das bei der Maus als kontextabhängiger Regulator der vaskulären und Gewebehomöostase fungiert. Es wird mit der Modulation des Verhaltens von Endothel- und glatten Muskelzellen, dem Remodeling der extrazellulären Matrix sowie inflammatorischer Signalübertragung in Verbindung gebracht und verknüpft stromale und immunologische Signale mit Veränderungen der Angiogenese und des Stoffwechsels. Die Angptl2-Aktivität überschneidet sich mit Signalwegen, die die Zytokinproduktion, die Rekrutierung von Leukozyten und den Gewebeumbau steuern, und ist daher relevant für Studien zu chronischen Entzündungen, Fibrose, Stoffwechselstörungen und tumorassoziierten Mikroumgebungen. Eine veränderte Angptl2-Expression wird häufig als treibender Faktor proinflammatorischer Zustände und des vaskulären Remodelings in kardiometabolischen und inflammatorischen Krankheitsmodellen untersucht.

Angptl2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Angptl2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Angptl2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Angptl2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Angptl2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Angptl2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Angptl2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Angptl2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Angptl2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Angptl2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.