AMPK alpha 1 Lentiviral Activation Particles (m2): sc-430618-LAC-2

Das Mausgen Prkaa1 kodiert die katalytische AMPK‑α1‑Untereinheit, einen zentralen Energiesensor, der den heterotrimeren AMPK‑Komplex bildet und unter energiearmen Bedingungen durch Phosphorylierung aktiviert wird, um die metabolische Anpassung zu koordinieren. AMPKα1 reguliert die Glukoseaufnahme, die Fettsäureoxidation, die Autophagie und die mitochondriale Homöostase über Signalwege, zu denen unter anderem die Hemmung von mTORC1 und die ULK1‑vermittelte Initiierung der Autophagie gehören, und integriert dabei Signale von LKB1 und CaMKK2. Eine dysregulierte Prkaa1/AMPK‑Signalübertragung wird mit metabolischer Inflammation, Insulinresistenz, hepatischer Steatose und einem veränderten Tumorzellstoffwechsel in Verbindung gebracht und verknüpft damit zelluläre Energiestress‑Antworten mit krankheitsrelevanten Phänotypen. Die Geneditierung von Prkaa1 in Mausmodellen ermöglicht mechanistische Untersuchungen der Nährstoffsensorik, der immunmetabolischen Umprogrammierung und der Kontrolle des Zellwachstums in verschiedenen Geweben und primären Zellsystemen.

AMPK alpha 1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Prkaa1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

AMPK alpha 1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Prkaa1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen AMPK alpha 1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Prkaa1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.