Amphiregulin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400987-ACT

AREG codifica per l’amfiregulina, un ligando secreto del recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR) che regola la proliferazione, la sopravvivenza e la differenziazione delle cellule epiteliali attraverso le vie di segnalazione a valle MAPK/ERK, PI3K/AKT e JAK/STAT. L’amfiregulina è inducibile da stimoli infiammatori e contribuisce alla riparazione tissutale, alla comunicazione stroma–epitelio e al rimodellamento del microambiente locale. Una disregolazione della segnalazione AREG–EGFR è stata associata ad alterazioni delle risposte immunitarie e a programmi di crescita aberranti osservati in molteplici contesti patologici, inclusi l’oncologia e gli stati infiammatori cronici. Come indicatore dell’attività della via EGFR, l’espressione di AREG è spesso utilizzata per studiare la dinamica della segnalazione dipendente dal ligando, la regolazione a feedback e le reti di segnalazione paracrine.

Amphiregulin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di AREG senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Amphiregulin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus AREG nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione AREG, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Amphiregulin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus AREG nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Amphiregulin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Amphiregulin nelle cellule tumorali con espressione di AREG silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.