Amphiphysin II CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401263

概要

BIN1はamphiphysin II（アンフィフィジンII）をコードしており、膜の曲率を感知するBARドメインタンパク質として、ダイナミン、ホスホイノシチド、アクチン細胞骨格との相互作用を介して、クラスリン介在性エンドサイトーシス、T管（T-tubule）の形成、膜リモデリングを協調的に制御する。ヒト細胞では、BIN1は小胞の切断と細胞骨格の組織化を結び付けることで輸送とシグナル伝達の恒常性に寄与し、筋や神経系といった文脈においてアイソフォーム特異的な機能を担う。BIN1の遺伝学的変化や発現変動は、中心核ミオパチーを含むミオパチーと関連しており、さらにアルツハイマー病に関連するアミロイド関連過程やエンドソーム輸送など、神経変性に関わる経路にも関与するとされる。これらの役割から、amphiphysin IIは膜ダイナミクス、シナプス生物学、筋細胞アーキテクチャの研究において有用な結節点となる。

Amphiphysin II CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるBIN1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、BIN1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、BIN1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Amphiphysin IIタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Amphiphysin IIシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、BIN1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Amphiphysin IIの機能に不可欠なBIN1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、BIN1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Amphiphysin II CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびAmphiphysin II CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、BIN1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Amphiphysin II HDRプラスミド（h）および Amphiphysin II HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはBIN1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のBIN1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。