Plasmide CRISPR d'Activation (h) alpha Synuclein: sc-417273-ACT

SNCA code l’alpha-synucléine humaine, une protéine présynaptique impliquée dans le trafic des vésicules synaptiques, la libération de neurotransmetteurs et la régulation de la courbure membranaire via sa liaison aux lipides. Elle s’associe à la machinerie de recyclage des vésicules et influence les voies de protéostase, notamment les systèmes ubiquitine–protéasome et autophagie–lysosome, qui contrôlent le renouvellement des protéines et l’agrégation. Une expression dérégulée de SNCA ou un mauvais repliement de la protéine est associé à la vulnérabilité neuronale et a été largement étudié dans le cadre de la pathologie des corps de Lewy et des mécanismes liés à la maladie de Parkinson. En tant que modulateur de l’homéostasie synaptique et du trafic intracellulaire, SNCA est fréquemment utilisé pour explorer les réponses au stress, la dysfonction mitochondriale et la signalisation neuro-inflammatoire dans des modèles cellulaires.

alpha Synuclein Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SNCA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

alpha Synuclein Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SNCA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SNCA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de alpha Synuclein. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SNCA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de alpha Synuclein au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie alpha Synuclein dans les cellules tumorales présentant une expression de SNCA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.