Plasmide Double Nickase (h) ALKBH5: sc-412371-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ALKBH5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ALKBH5 Double Nickase (h) et le plasmide ALKBH5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ALKBH5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ALKBH5 | sc-412371-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ALKBH5 | sc-412371-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ALKBH5 humain code une dioxygénase dépendante du Fe(II) et du 2‑oxoglutarate, qui agit comme déméthylase de l’ARN N6‑méthyladénosine (m6A), contribuant ainsi à la régulation épitranscriptomique du métabolisme de l’ARNm. En modulant les niveaux de m6A, ALKBH5 influence l’épissage de l’ARN, l’export nucléaire, la traduction et la stabilité, avec des répercussions sur des programmes contrôlant la progression du cycle cellulaire, l’adaptation au stress et la différenciation. L’activité d’ALKBH5 s’inscrit à l’interface de voies plus larges de maturation et de traitement des ARN et peut modifier la dynamique d’expression de transcrits oncogéniques et développementaux. Une dérégulation du renouvellement de la m6A dépendant d’ALKBH5 a été impliquée dans des phénotypes liés à des maladies, notamment une prolifération aberrante, une altération des états de type souche et une perturbation des réseaux de signalisation immunitaires et métaboliques.
ALKBH5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ALKBH5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ALKBH5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ALKBH5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ALKBH5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.