ALKBH4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406350

Descripción general

ALKBH4 codifica un miembro de la familia AlkB de dioxigenasas dependientes de Fe(II)/2-oxoglutarato, implicadas en reacciones de desmetilación oxidativa sobre ácidos nucleicos y proteínas. En humanos, ALKBH4 se ha vinculado a la regulación de la dinámica del citoesqueleto de actina y de la arquitectura celular, lo que concuerda con funciones en procesos como la migración, la adhesión y la división celular. A través de estas actividades, ALKBH4 se estudia a menudo en el contexto de la estabilidad genómica, las respuestas al estrés y el control transcripcional o postranscripcional. La alteración de la expresión o la función de ALKBH4 se ha explorado en múltiples escenarios relevantes para enfermedades, incluidos fenotipos asociados al cáncer en los que la remodelación del citoesqueleto y el metabolismo del ADN/ARN suelen estar desregulados.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ALKBH4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ALKBH4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ALKBH4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ALKBH4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ALKBH4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ALKBH4 para la investigación de la señalización de ALKBH4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ALKBH4 críticos para la función de ALKBH4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ALKBH4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ALKBH4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ALKBH4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ALKBH4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ALKBH4 (h) y el plásmido HDR ALKBH4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ALKBH4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ALKBH4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.