ALKBH4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406350

Panoramica

ALKBH4 codifica un membro della famiglia AlkB di diossigenasi Fe(II)/2‑ossoglutarato‑dipendenti, implicate in reazioni di demetilazione ossidativa su acidi nucleici e proteine. Nell’uomo, ALKBH4 è stato associato alla regolazione della dinamica del citoscheletro di actina e dell’architettura cellulare, coerentemente con ruoli in processi quali migrazione, adesione e divisione cellulare. In virtù di queste attività, ALKBH4 viene spesso studiato nel contesto della stabilità del genoma, delle risposte allo stress e del controllo trascrizionale o post‑trascrizionale. Alterazioni dell’espressione o della funzione di ALKBH4 sono state investigate in diversi contesti rilevanti per la malattia, incluso in fenotipi associati al cancro, in cui il rimodellamento del citoscheletro e il metabolismo di DNA/RNA risultano frequentemente disregolati.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ALKBH4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ALKBH4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ALKBH4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ALKBH4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ALKBH4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ALKBH4 per lo studio della segnalazione di ALKBH4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ALKBH4 critici per la funzione di ALKBH4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ALKBH4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ALKBH4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ALKBH4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ALKBH4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ALKBH4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ALKBH4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ALKBH4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ALKBH4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.