ALKB Plasmide Double Nickase (h): sc-408412-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ALKB Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ALKB Double Nickase Plasmid (h) e il ALKB Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ALKBH1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ALKB Antibody (F-4): sc-374301
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ALKB Plasmide Double Nickase (h) | sc-408412-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ALKB Plasmide Double Nickase (h2) | sc-408412-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ALKBH1 codifica una diossigenasi dipendente da Fe(II)/2-ossoglutarato implicata nella demetilazione ossidativa degli acidi nucleici e nella regolazione di processi associati alla cromatina. La proteina è stata collegata alla riparazione del DNA e alle risposte allo stress associato alla replicazione, e contribuisce al mantenimento della stabilità del genoma attraverso la modulazione delle modifiche delle basi. L’attività di ALKBH1 si interseca con vie che governano la regolazione epigenetica, il metabolismo degli acidi nucleici mitocondriali e nucleari e l’adattamento cellulare allo stress genotossico. La deregolazione dell’espressione o della funzione di ALKBH1 è stata associata a programmi proliferativi alterati e a fenotipi rilevanti per i tumori, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici in biologia del cancro e nella segnalazione del danno al DNA.
ALKB Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ALKBH1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ALKBH1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ALKBH1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ALKBH1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.