ALK-1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400728-LAC

ACVRL1 codifica l’activin receptor-like kinase 1 (ALK-1), un recettore di tipo I a attività chinasica serina/treonina della superfamiglia TGF-β/BMP, altamente attivo nelle cellule endoteliali. In seguito al legame del ligando con BMP9 o BMP10 e con i recettori di tipo II, ALK-1 trasduce il segnale tramite SMAD1/5/8 per regolare programmi trascrizionali che controllano la gemmazione angiogenica, la maturazione dei vasi e la quiescenza endoteliale. Il crosstalk con ALK5/SMAD2/3 e gli input delle vie VEGF e Notch contribuiscono a bilanciare segnali proliferativi e stabilizzanti durante il rimodellamento vascolare. Una segnalazione di ACVRL1 deregolata è associata alla biologia delle malformazioni vascolari, inclusa la teleangectasia emorragica ereditaria, rendendolo un nodo chiave per lo studio delle dinamiche di segnalazione endoteliale e dei meccanismi di omeostasi vascolare.

Le particelle di attivazione lentivirale ALK-1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ACVRL1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ALK-1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ACVRL1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ALK-1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ACVRL1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.