Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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Alix Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422154
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Alix Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Alix, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Alix Antibody (1A12): sc-53540
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Alix Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-422154 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Pdcd6ip codifica ALIX, un adattatore multifunzionale che collega il rimodellamento delle membrane al traffico endosomiale attraverso interazioni con componenti dell’ESCRT, incluse le proteine CHMP4, e con partner quali TSG101. Nelle cellule di topo, ALIX contribuisce alla biogenesi dei corpi multivescicolari, al rilascio di esosomi, all’abscissione nella citochinesi e alla riparazione della membrana plasmatica, e può influenzare la segnalazione legata all’apoptosi tramite le sue reti di legame. L’attività ESCRT dipendente da ALIX viene inoltre cooptata durante la gemmazione dei virus con involucro e regola il turnover dei recettori di membrana, collegando Pdcd6ip a vie che controllano la segnalazione cellulare e la proteostasi. La disregolazione del traffico mediato da ESCRT/ALIX è stata associata, in sistemi sperimentali, a neurodegenerazione, biologia tumorale e patogenesi immunitaria e virale, rendendo Pdcd6ip un nodo utile per studi meccanicistici della dinamica delle membrane.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Alix (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pdcd6ip in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pdcd6ip insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pdcd6ip a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Alix.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pdcd6ip per lo studio della segnalazione di Alix, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Pdcd6ip critici per la funzione di Alix
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pdcd6ip per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Alix CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Alix CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pdcd6ip. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Alix Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Alix (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pdcd6ip per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pdcd6ip definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.