ALAS-E Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403752

Panoramica

ALAS2 codifica la 5-aminolevulinato sintasi eritroide-specifica (ALAS-E), un enzima mitocondriale dipendente dal fosfato di piridossale che catalizza la prima tappa, e quella limitante la velocità, della biosintesi dell’eme condensando glicina e succinil‑CoA per formare 5‑aminolevulinato. La sua attività integra il metabolismo mitocondriale con la differenziazione eritroide e la formazione di emoglobina, supportando l’utilizzo del ferro e la produzione di porfirine nei globuli rossi in sviluppo. ALAS-E è regolata da programmi trascrizionali eritroidi e dalla disponibilità di eme/ferro, collegandosi così alle vie che controllano la funzione mitocondriale e lo stress ossidativo negli eritroblasti. Alterazioni genetiche o funzionali di ALAS2 sono associate a una sintesi aberrante di porfirine/eme e possono essere studiate in modelli di maturazione eritroide e di fisiopatologia dei globuli rossi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ALAS-E (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ALAS2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ALAS2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ALAS2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ALAS-E.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ALAS2 per lo studio della segnalazione di ALAS-E, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ALAS2 critici per la funzione di ALAS-E
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ALAS2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ALAS-E CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ALAS-E CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ALAS2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ALAS-E Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ALAS-E (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ALAS2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ALAS2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.