Ah Receptor Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-419054-LAC

Il gene murino **Ahr** codifica il recettore degli idrocarburi arilici (AhR), un fattore di trascrizione attivato da ligando che funge da sensore ambientale centrale, collegando l’esposizione a xenobiotici alla riprogrammazione trascrizionale. Una volta attivato, AhR trasloca nel nucleo, eterodimerizza con ARNT e si lega agli elementi di risposta agli xenobiotici per regolare geni coinvolti nel metabolismo di fase I/II, come gli enzimi del citocromo P450, intersecando le vie di segnalazione dello stress ossidativo e dell’infiammazione. Oltre alla detossificazione, AhR influenza la differenziazione delle cellule immunitarie, il mantenimento della barriera epiteliale e i processi di sviluppo attraverso un crosstalk con NF-κB, Wnt/β-catenina e le reti di regolazione circadiana. Una segnalazione di AhR deregolata è stata implicata in risposte tossicologiche e fenotipi infiammatori, ed è frequentemente studiata in contesti quali disfunzione di barriera, patologie immuno-mediate e programmi trascrizionali associati alla carcinogenesi.

Le particelle di attivazione lentivirale Ah Receptor (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Ahr in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Ah Receptor (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Ahr, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Ah Receptor. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Ahr e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.