AGTRAP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419051

Panoramica

Agtrap codifica la proteina associata al recettore dell’angiotensina II (AGTRAP), un regolatore associato alla membrana che si lega ad AGTR1 e influenza il traffico del recettore, la sua internalizzazione e la dinamica della segnalazione a valle. Attraverso la modulazione delle vie dipendenti dall’angiotensina II, AGTRAP può influire sulla segnalazione MAPK/ERK, sulle risposte cellulari allo stress e su programmi trascrizionali infiammatori, collegandosi così all’omeostasi tissutale nei sistemi cardiovascolare e renale. Nei modelli murini, l’alterazione dell’attività di Agtrap è stata utilizzata per indagare i meccanismi alla base della regolazione della pressione arteriosa, del rimodellamento vascolare e della funzione renale. Queste proprietà rendono AGTRAP un nodo utile per studiare la regolazione dei GPCR e la segnalazione del sistema renina–angiotensina in tipi cellulari fisiologicamente rilevanti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AGTRAP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Agtrap in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Agtrap insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Agtrap a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AGTRAP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Agtrap per lo studio della segnalazione di AGTRAP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Agtrap critici per la funzione di AGTRAP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Agtrap per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AGTRAP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal AGTRAP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Agtrap. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AGTRAP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR AGTRAP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Agtrap per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Agtrap definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.