AGRP Plasmide Double Nickase (h): sc-402410-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AGRP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AGRP Double Nickase Plasmid (h) e il AGRP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AGRP. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AGRP Antibody (MM0085-32B12): sc-517457
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AGRP Plasmide Double Nickase (h) | sc-402410-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AGRP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402410-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AGRP codifica la proteina agouti-related (AGRP), un neuropeptide prodotto principalmente da neuroni dell’ipotalamo che agisce come antagonista endogeno/agonista inverso dei recettori melanocortinici, in particolare MC3R e MC4R. Contrastando la segnalazione melanocortinica, AGRP contribuisce a regolare l’omeostasi energetica, il comportamento alimentare e le risposte neuroendocrine tramite vie interconnesse che coinvolgono peptidi derivati da POMC e circuiti sensibili a leptina e insulina. Alterazioni della segnalazione di AGRP sono state implicate in una regolazione disfunzionale dell’appetito e del peso corporeo, e il peptide è spesso studiato nel contesto della biologia delle malattie metaboliche e dei circuiti ipotalamici. In quanto peptide secreto, AGRP rappresenta anche un modello sperimentale gestibile per indagare la maturazione dei neuropeptidi, la secrezione e la segnalazione mediata da recettori nei sistemi neuronali.
AGRP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AGRP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AGRP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AGRP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AGRP interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.