AGRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419045

概要

アグーチ関連ニューロペプチド（AGRP）はマウスのAgrp遺伝子にコードされる摂食促進性のニューロペプチドで、主にエネルギーバランスと摂食行動を制御する弓状核ニューロンで発現します。AGRPはメラノコルチン受容体、特にMC3RおよびMC4Rに対して内因性の拮抗薬または逆作動薬として作用し、食欲抑制性のメラノコルチンシグナルに拮抗することで、食欲、脂肪量、代謝率を調節します。Agrp発現ニューロンは内分泌および栄養シグナルを統合し、血糖恒常性や神経内分泌出力を制御する視床下部回路と連関します。AGRPに関連する経路の制御異常は、肥満、メタボリックシンドローム、糖尿病関連表現型、ならびにストレスに伴う摂食行動変化のモデルにおいて、しばしば研究対象となっています。

AGRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAgrp遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Agrp内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Agrpのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AGRPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AGRPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Agrp欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AGRPの機能に不可欠なAgrpエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Agrpゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AGRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAGRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Agrp遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AGRP HDRプラスミド（m）および AGRP HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAgrpホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAgrp標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。