AGRP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419045

Panoramica

Il neuropeptide correlato all’agouti (AGRP), codificato dal gene Agrp del topo, è un neuropeptide orexigeno espresso prevalentemente nei neuroni del nucleo arcuato che regolano il bilancio energetico e il comportamento alimentare. AGRP agisce come antagonista endogeno o agonista inverso dei recettori della melanocortina, in particolare MC3R e MC4R, contrastando la segnalazione melanocortinica anoressigena per modulare appetito, adiposità e tasso metabolico. I neuroni che esprimono Agrp integrano segnali endocrini e nutrizionali e interagiscono con i circuiti ipotalamici che controllano l’omeostasi del glucosio e le risposte neuroendocrine. La disregolazione delle vie associate ad AGRP è frequentemente studiata in modelli di obesità, sindrome metabolica, fenotipi associati al diabete e alterazioni del comportamento ingestivo legate allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AGRP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Agrp in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Agrp insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Agrp a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AGRP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Agrp per lo studio della segnalazione di AGRP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Agrp critici per la funzione di AGRP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Agrp per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AGRP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal AGRP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Agrp. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AGRP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR AGRP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Agrp per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Agrp definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.