Agrin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401256

概要

AGRNは、細胞外マトリックスに存在する大型のヘパラン硫酸プロテオグリカンであるアグリン（agrin）をコードしており、細胞—マトリックス間シグナル伝達や膜の特殊化（分化・機能局在）の組織化に関与します。神経筋および神経系の文脈では、アグリンはLRP4などの受容体に結合してMuSK依存性シグナルを活性化し、アセチルコリン受容体（AChR）のクラスター形成とシナプス成熟を支えることで、シナプス形成と安定化を調節します。シナプス形成にとどまらず、アグリンはジストログリカンやインテグリンとの相互作用を介して、細胞骨格の再編成、接着、メカノトランスダクションにも影響し、組織構築を形作ります。AGRNの発現やプロセシングの異常は、神経筋接合部の欠陥やシナプス恒常性の変化と関連づけられており、さらに線維化、神経変性、腫瘍微小環境のリモデリングに関わる経路との関連でも研究されています。

Agrin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるAGRN遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、AGRN内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、AGRNのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Agrinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Agrinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、AGRN欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Agrinの機能に不可欠なAGRNエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、AGRNゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Agrin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびAgrin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、AGRN遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Agrin HDRプラスミド（h）および Agrin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAGRNホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAGRN標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。