aggrecan Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400760

Panoramica

ACAN codifica l’aggrecano, un grande proteoglicano a solfato di condroitina che, legandosi all’acido ialuronico e alla proteina di collegamento (link protein), costituisce l’impalcatura idratata della matrice extracellulare della cartilagine, consentendo la resistenza ai carichi compressivi. Il turnover dell’aggrecano è coordinato dai programmi anabolici dei condrociti e dalla proteolisi extracellulare catabolica, inclusa la scissione da parte delle aggrecanasi ADAMTS e i percorsi di rimodellamento della matrice che determinano la biomeccanica del tessuto. Alterazioni dell’espressione di ACAN o del processamento dell’aggrecano compromettono l’omeostasi cartilaginea e sono implicate in fenotipi scheletrici degenerativi e dello sviluppo, rendendolo un nodo chiave per lo studio dell’organizzazione della matrice extracellulare e della meccanobiologia. ACAN è quindi ampiamente utilizzato come marcatore e determinante funzionale negli studi sulla differenziazione dei condrociti, sulla biologia della cartilagine di accrescimento e sull’assemblaggio della matrice cartilaginea.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO aggrecan (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ACAN in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ACAN insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ACAN a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina aggrecan.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ACAN per lo studio della segnalazione di aggrecan, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ACAN critici per la funzione di aggrecan
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ACAN per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal aggrecan CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal aggrecan CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ACAN. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal aggrecan Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR aggrecan (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ACAN per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ACAN definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.