ADRP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400802-ACT

PLIN2は、脂肪分化関連タンパク質（ADRP）をコードしています。ADRPは脂質滴に結合するペリリピンの一種で、中性脂質の貯蔵部位を被覆し、その安定性、代謝回転、ならびにリパーゼによるアクセスを調節します。ADRPは細胞内のトリグリセリドおよびコレステリルエステルの取り扱いを協調して制御し、脂質滴の生合成を細胞のエネルギーバランス、酸化ストレス応答、代謝シグナル伝達と結び付けます。PLIN2発現の変化は、代謝機能障害や炎症状態でみられる脂質蓄積の表現型と関連しており、肝脂肪化、動脈硬化における泡沫細胞形成、腫瘍の脂質代謝といった文脈で頻繁に研究されています。脂質貯蔵動態の指標として、ADRPは脂肪酸の取り込み、エステル化、リポファジーを制御する経路を解析するために広く用いられています。

ADRP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PLIN2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ADRP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PLIN2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPLIN2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ADRPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPLIN2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるADRP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPLIN2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるADRP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。