Adipsin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401782

Panoramica

Il fattore D del complemento (CFD), noto anche come adipsina, è una serina proteasi che regola la via alternativa del complemento scindendo il fattore B quando è legato a C3b, favorendo l’assemblaggio della C3 convertasi e amplificando l’attivazione del complemento. Nell’uomo, il CFD è fortemente espresso nel tessuto adiposo e collega la sorveglianza immunitaria innata con l’omeostasi metabolica, influenzando il tono infiammatorio e la segnalazione delle adipokine. Un’alterata attività del CFD è stata associata a un’infiammazione deregolata guidata dal complemento ed è stata studiata nel contesto del rimodellamento del tessuto adiposo, dei tratti cardiometabolici e del danno tissutale mediato dal sistema immunitario. In quanto enzima secreto, l’adipsina rappresenta un nodo accessibile per analizzare il crosstalk tra la proteolisi del complemento, le reti citochiniche e le risposte cellulari allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Adipsin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CFD in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CFD insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CFD a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Adipsin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CFD per lo studio della segnalazione di Adipsin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CFD critici per la funzione di Adipsin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CFD per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Adipsin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Adipsin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CFD. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Adipsin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Adipsin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CFD per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CFD definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.