AdipoR2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401848-ACT

ADIPOR2 codifica o receptor 2 da adiponectina (AdipoR2), um receptor de sete domínios transmembrana que medeia a sinalização metabólica dependente de adiponectina em múltiplos tecidos. A ativação do AdipoR2 favorece a oxidação de ácidos graxos e a homeostase da glicose, em parte por meio de programas transcricionais associados à AMPK e ao PPARα, e influencia respostas ao estresse celular e a sinalização inflamatória. Alterações na expressão ou na sinalização de ADIPOR2 têm sido associadas à resistência à insulina, à síndrome metabólica, à doença hepática gordurosa não alcoólica e a um risco cardiometabólico mais amplo, tornando-o um alvo relevante para estudos mecanísticos de vias de adipocinas.

AdipoR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADIPOR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AdipoR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADIPOR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADIPOR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AdipoR2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADIPOR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AdipoR2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AdipoR2 em células tumorais com expressão de ADIPOR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.