ADAR1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401611-LAC

ADAR (ADAR1) codifica un’adenosina deaminasi che catalizza l’editing dell’RNA da A a I all’interno di RNA a doppio filamento, rimodellando le sequenze dei trascritti, lo splicing e le interazioni dipendenti dalla struttura dell’RNA. Attraverso l’editing di dsRNA endogeno, ADAR1 limita l’attivazione aberrante dell’immunità innata riducendone il riconoscimento da parte dei sensori citosolici dell’RNA e, di conseguenza, modula la segnalazione dell’interferone di tipo I e i programmi genici infiammatori. ADAR1 influenza inoltre la processazione dei microRNA e la ricodifica di trascritti selezionati, con effetti sulle decisioni di destino cellulare e sulle risposte allo stress. Un’attività di ADAR1 deregolata e paesaggi di editing dell’RNA alterati sono stati associati a risposte antivirali modificate e a patobiologia infiammatoria, oltre che al rimodellamento del trascrittoma associato al cancro.

Le particelle di attivazione lentivirale ADAR1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ADAR in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ADAR1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ADAR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ADAR1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ADAR e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.