Plásmido Doble Nickase (h) ADAR1: sc-401611-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ADAR1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ADAR1 (h) y el plásmido de doble nickasa ADAR1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ADAR. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ADAR1 Anticuerpo (D-8): sc-271854
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ADAR1 | sc-401611-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ADAR1 | sc-401611-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADAR codifica ADAR1, una adenosina desaminasa inducible por interferón que cataliza la edición de ARN de A a I dentro de estructuras de ARN de doble cadena, remodelando secuencias codificantes, el empalme, la estabilidad del ARN y el direccionamiento por miARN. Al editar dsRNA endógeno, ADAR1 limita la activación aberrante de sensores inmunitarios innatos como MDA5/MAVS y la señalización posterior de interferón de tipo I, ayudando a mantener la discriminación entre lo propio y lo no propio. ADAR1 también influye en el procesamiento de ARN en respuestas al estrés y puede modular los resultados de la traducción mediante la edición de elementos repetitivos y transcritos estructurados. La actividad desregulada de ADAR1 o un desequilibrio en la edición de ARN se ha asociado con interferonopatías, fenotipos inflamatorios y alteraciones en las interacciones tumor–sistema inmune, lo que lo convierte en un nodo clave para estudiar la vigilancia del ARN y la homeostasis de la inmunidad innata.
ADAR1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ADAR en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ADAR. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ADAR. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ADAR alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.