Plásmido CRISPR de Activación (h) ADAMTS-13: sc-402782-ACT

ADAMTS13 codifica ADAMTS-13, una metaloproteasa secretada dependiente de zinc que escinde de forma específica los multímeros ultragrandes del factor de von Willebrand (VWF), regulando así la adhesión plaquetaria y la formación de trombos bajo condiciones de alto esfuerzo cortante. Al controlar el tamaño y la distribución de los multímeros de VWF, ADAMTS-13 modula la proteólisis extracelular relacionada con la hemostasia y las interacciones endotelio-plaqueta dentro del microambiente vascular. La actividad reducida de ADAMTS-13 o el procesamiento desregulado de VWF se asocian con trastornos trombóticos microangiopáticos, lo que convierte a ADAMTS13 en un locus clave para estudiar la biología de la coagulación y la inflamación vascular. ADAMTS-13 también proporciona un punto de entrada funcional para investigar vías que conectan la activación endotelial, la mecanobiología dependiente del esfuerzo cortante y las redes de proteasas plasmáticas.

ADAMTS-13 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ADAMTS13 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ADAMTS-13 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ADAMTS13 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ADAMTS13, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ADAMTS-13. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ADAMTS13 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ADAMTS-13 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ADAMTS-13 en células tumorales con expresión de ADAMTS13 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.