Particules Lentivirales d'Activation (h) ADAM9: sc-403665-LAC

ADAM9 code une métalloprotéase–désintégrine transmembranaire qui médie le clivage (shedding) de l’ectodomaine de diverses protéines de surface cellulaire, modulant le remodelage de la matrice extracellulaire, l’adhérence cellule–cellule et la disponibilité des récepteurs/ligands. Par le traitement protéolytique de substrats impliqués dans la signalisation des facteurs de croissance et des cytokines, ADAM9 peut influencer des voies liées à la dynamique épithélio-mésenchymateuse, à la migration et aux réponses inflammatoires. Son activité s’articule avec l’adhérence dépendante des intégrines et avec des réseaux de métalloprotéases qui régulent le renouvellement des protéines membranaires et la protéolyse péricellulaire. Une expression ou une activité dérégulée d’ADAM9 a été associée à la biologie de l’invasion tumorale, au remodelage lié à la fibrose et à des processus neuro-inflammatoires, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la signalisation pilotée par les protéases.

Les particules d'activation lentivirales ADAM9 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ADAM9 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ADAM9 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ADAM9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ADAM9. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ADAM9 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.