ACSVL6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405327-ACT

SLC27A5 codifica a ACSVL6, uma acil-CoA sintetase de ácidos graxos de cadeia muito longa que catalisa a ativação, dependente de ATP, de ácidos graxos de cadeia longa e muito longa em tioésteres acil-CoA, uma etapa-chave que regula a utilização de ácidos graxos. Ao controlar a disponibilidade de acil-CoA, a ACSVL6 influencia processos de processamento lipídico, incluindo a β-oxidação, a remodelagem de triglicerídeos e o fluxo metabólico mais amplo pelas vias de síntese e degradação de lipídios. Alterações na ativação de ácidos graxos e no metabolismo de acil-CoA estão associadas à desregulação da homeostase lipídica, com relevância para estados de estresse metabólico que afetam vias centradas no fígado e o balanço energético sistêmico. Como resultado, SLC27A5 é comumente estudado em contextos de metabolismo lipídico, adaptação energética celular e sinalização associada a doenças metabólicas.

ACSVL6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC27A5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ACSVL6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC27A5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC27A5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ACSVL6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC27A5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ACSVL6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ACSVL6 em células tumorais com expressão de SLC27A5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.