ACSVL1 Plasmide Double Nickase (m): sc-424084-NIC

Slc27a2 codifica l’acil‑CoA sintetasi per acidi grassi a catena molto lunga 1 (ACSVL1), un enzima associato al reticolo endoplasmatico e ai perossisomi che attiva gli acidi grassi a catena lunga e molto lunga trasformandoli nei corrispondenti tioesteri acil‑CoA. Questa reazione rappresenta un punto di ingresso chiave per le vie di utilizzo dei lipidi, collegando l’assorbimento degli acidi grassi alla β‑ossidazione, al rimodellamento lipidico e all’omeostasi energetica, e sostiene il coordinamento metabolico tra perossisomi e mitocondri. Nelle cellule di topo, l’attività di ACSVL1 influenza i pool intracellulari di lipidi bioattivi in grado di modulare la segnalazione di PPAR e programmi trascrizionali metabolici più ampi. La disregolazione della gestione degli acidi grassi a catena molto lunga è rilevante negli studi su steatosi epatica, insulino‑resistenza e fenotipi neurometabolici, in cui vengono analizzati i meccanismi di accumulo lipidico e stress ossidativo.

ACSVL1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Slc27a2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Slc27a2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Slc27a2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Slc27a2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.