ACSL3 Double Nickase Plasmid (h): sc-403546-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ACSL3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ACSL3 Double-Nickase-Plasmid (h) und ACSL3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ACSL3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ACSL3: sc-166374
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ACSL3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403546-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACSL3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403546-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACSL3 (Acyl-CoA-Synthetase, Mitglied 3 der Familie der langkettigen Isoformen) ist ein mit dem endoplasmatischen Retikulum assoziiertes Enzym, das langkettige Fettsäuren zu Acyl‑CoA‑Thioestern aktiviert – ein notwendiger Schritt für die Lipidbiosynthese und die Nutzung von Fettsäuren. Indem ACSL3 Fettsäuren in die Bildung von Phospholipiden und neutralen Lipiden einschleust, beeinflusst es den Umbau von Membranen, die Biogenese von Lipidtröpfchen und übergeordnete Stoffwechselprogramme, die mit Zellwachstum und Stressanpassung verknüpft sind. Seine Aktivität ist mit Signalwegen verknüpft, die die Aufnahme von Fettsäuren, die Lipidhomöostase des ER und die mitochondriale Lipidversorgung steuern, und prägt dadurch Bioenergetik und die Verfügbarkeit signalaktiver Lipide. Eine veränderte Regulation von ACSL3 wurde in Zusammenhängen metabolischer Umprogrammierung, lipidassoziierter Entzündung und onkogener Transformation untersucht, bei denen die Aktivierung von Fettsäuren zu phänotypbestimmenden Lipidprofilen beitragen kann.
ACSL3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ACSL3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ACSL3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ACSL3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ACSL3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.