ACSL1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402922-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ACSL1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ACSL1 Double-Nickase-Plasmid (h) und ACSL1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ACSL1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ACSL1: sc-293281
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ACSL1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402922-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACSL1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402922-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACSL1 (Acyl‑CoA‑Synthetase, langkettiges Familienmitglied 1) katalysiert die ATP‑abhängige Aktivierung langkettiger Fettsäuren zu Acyl‑CoA – ein irreversibler („committed“) Schritt, der Lipide in Richtung mitochondrialer β‑Oxidation, Triglyzerid‑ und Phospholipidsynthese sowie lipidbasierter Signalwege lenkt. Durch die Kontrolle der Zusammensetzung des Acyl‑CoA‑Pools beeinflusst ACSL1 den Membranumbau, die Dynamik von Lipidtröpfchen und die metabolische Kopplung zwischen Fettsäureaufnahme und nachgeschalteter Oxidation bzw. Speicherung. Seine Aktivität ist eng mit PPAR‑regulierten Stoffwechselprogrammen und breiteren Netzwerken verknüpft, die Insulinsensitivität, Entzündung und die zelluläre Energiehomöostase steuern. Eine veränderte ACSL1‑Expression oder ‑Regulation wurde mit metabolischer Dysregulation und lipidgetriebenen Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Adipositas, Typ‑2‑Diabetes und die kardiovaskuläre Biologie relevant sind, und unterstützt damit mechanistische Untersuchungen in krankheitsrelevanten Zellmodellen.
ACSL1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ACSL1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ACSL1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ACSL1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ACSL1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.