Plasmide CRISPR/Cas9 KO ACBD5 (h): sc-417183

Présentation

ACBD5 code une protéine péroxysomale contenant un domaine de liaison aux acyl-CoA, qui soutient la gestion intracellulaire des lipides en se liant aux esters d’acyl-CoA à longue chaîne et en coordonnant le métabolisme lipidique associé aux péroxysomes. Elle se localise à la membrane du péroxysome et contribue à la communication entre le péroxysome et d’autres organites, influençant le trafic des acides gras et l’organisation des voies péroxysomales impliquées dans l’homéostasie lipidique. Par son rôle dans la dynamique des péroxysomes et le traitement des lipides, ACBD5 est pertinente pour les réponses au stress cellulaire liées à des modifications de la composition lipidique et à un dysfonctionnement des organites. La dérégulation du métabolisme lipidique dépendant des péroxysomes est fréquemment étudiée dans le contexte de la neurodégénérescence, des déséquilibres métaboliques et de la signalisation inflammatoire, faisant d’ACBD5 une cible utile pour des investigations mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ACBD5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ACBD5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ACBD5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ACBD5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ACBD5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ACBD5 pour l'étude de la signalisation de ACBD5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ACBD5 essentiels à la fonction de ACBD5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ACBD5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ACBD5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ACBD5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ACBD5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ACBD5 plasmide HDR (h) et le ACBD5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ACBD5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ACBD5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.