ABCG5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402729-ACT

ABCG5 codifica um transportador da família ATP-binding cassette (ABC) que forma um heterodímero com a ABCG8 para mediar o efluxo de esteróis através da membrana apical dos enterócitos e da membrana canalicular dos hepatócitos. Esse complexo transportador limita a absorção intestinal de esteróis da dieta e promove a secreção biliar de colesterol e esteróis vegetais, contribuindo para a homeostase lipídica do organismo como um todo. A atividade da ABCG5 integra-se às vias hepáticas e intestinais de processamento de esteróis, incluindo programas transcricionais regulados por LXR e o metabolismo de ácidos biliares. Disfunção genética ou expressão reduzida de ABCG5 está associada a fenótipos de acúmulo de esteróis, como a sitosterolemia, e pode influenciar modelos de pesquisa relacionados à dislipidemia.

ABCG5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ABCG5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ABCG5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ABCG5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ABCG5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ABCG5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ABCG5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ABCG5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ABCG5 em células tumorais com expressão de ABCG5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.