Plásmido Doble Nickase (h) ABCG2: sc-416737-NIC

ABCG2 (también conocido como BCRP) codifica un transportador de eflujo de la familia ABC (ATP-binding cassette) que limita la acumulación intracelular de diversos xenobióticos y metabolitos endógenos. Localizado en la membrana plasmática de poblaciones celulares de barrera y con características de células madre, ABCG2 contribuye al transporte epitelial, la desintoxicación celular y la protección frente al estrés oxidativo y químico mediante la exportación de sustratos dependiente de ATP. Su actividad se relaciona con el manejo farmacocinético y con programas de respuesta al estrés al modular la exposición intracelular a pequeñas moléculas y a metabolitos relacionados con las porfirinas. La expresión o función desregulada de ABCG2 se estudia con frecuencia en el contexto de fenotipos de resistencia a múltiples fármacos, la biología de las barreras tisulares y la heterogeneidad tumoral, así como de variantes hereditarias que afectan la actividad del transportador.

ABCG2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ABCG2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ABCG2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ABCG2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ABCG2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.