Plásmido Doble Nickase (h) ABCD1: sc-405301-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ABCD1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ABCD1 (h) y el plásmido de doble nickasa ABCD1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ABCD1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ABCD1 | sc-405301-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ABCD1 | sc-405301-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABCD1 codifica un transportador peroxisomal de la familia de transportadores ABC (ATP-binding cassette) que importa acil-CoA de ácidos grasos de cadena muy larga (VLCFA) a los peroxisomas para su β-oxidación, lo que ayuda a mantener la homeostasis lipídica y la composición de las membranas. A través de su papel en el catabolismo peroxisomal de ácidos grasos, ABCD1 se relaciona con vías que controlan el equilibrio redox, el acoplamiento metabólico entre mitocondrias y peroxisomas y la señalización inflamatoria asociada a la acumulación de lípidos. Las variantes con pérdida de función en el ABCD1 humano se asocian con la adrenoleucodistrofia ligada al cromosoma X, en la que el deterioro de la degradación peroxisomal de VLCFA conduce a niveles elevados de estos ácidos grasos y a fenotipos posteriores de estrés celular. Por ello, la alteración de ABCD1 se utiliza ampliamente para modelar la disfunción peroxisomal y la patología celular impulsada por lípidos en tipos celulares relevantes.
ABCD1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ABCD1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ABCD1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ABCD1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ABCD1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.