ABCD1 Plasmide Double Nickase (h): sc-405301-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ABCD1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ABCD1 Double Nickase Plasmid (h) e il ABCD1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ABCD1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ABCD1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405301-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ABCD1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405301-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABCD1 codifica un trasportatore perossisomiale della famiglia ABC (ATP-binding cassette) che importa nei perossisomi gli acil-CoA di acidi grassi a catena molto lunga (VLCFA) per la β-ossidazione, contribuendo a mantenere l’omeostasi lipidica e la composizione delle membrane. Attraverso il suo ruolo nel catabolismo perossisomiale degli acidi grassi, ABCD1 si intreccia con vie che regolano l’equilibrio redox, l’accoppiamento metabolico mitocondrio–perossisoma e la segnalazione infiammatoria legata all’accumulo di lipidi. Varianti loss-of-function dell’ABCD1 umano sono associate all’adrenoleucodistrofia legata all’X, nella quale una degradazione perossisomiale compromessa dei VLCFA porta a un aumento dei VLCFA e a fenotipi di stress cellulare a valle. L’alterazione di ABCD1 è quindi ampiamente utilizzata per modellare la disfunzione perossisomiale e la patologia cellulare guidata dai lipidi in tipi cellulari rilevanti.
ABCD1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ABCD1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ABCD1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ABCD1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ABCD1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.