ABCB6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403817-ACT

ABCB6 codifica un trasportatore della famiglia ABC (ATP-binding cassette) localizzato principalmente nei mitocondri e coinvolto nel metabolismo delle porfirine e dell’eme, a supporto della differenziazione eritroide e dell’omeostasi mitocondriale. Regolando la gestione intracellulare degli intermedi porfirinici e di metaboliti correlati, ABCB6 influenza le risposte allo stress ossidativo e processi bioenergetici più ampi. Alterazioni dell’attività di ABCB6 sono state associate a una biosintesi dell’eme deregolata, a fenotipi dei globuli rossi e a disfunzione mitocondriale, rendendolo rilevante per studi sul rimodellamento metabolico e sulla segnalazione dello stress. In alcuni contesti ABCB6 è utilizzato anche come marcatore cellulare, consentendo indagini sulla biologia dei trasportatori e su vie specifiche degli organelli.

ABCB6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ABCB6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ABCB6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ABCB6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ABCB6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ABCB6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ABCB6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ABCB6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ABCB6 nelle cellule tumorali con espressione di ABCB6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.