Plásmido CRISPR de Activación (m) ABC1: sc-418929-ACT

El gen Abca1 de ratón codifica el transportador ABC1 de la familia ATP-binding cassette, un regulador clave del eflujo celular de colesterol y fosfolípidos hacia las apolipoproteínas, que favorece la biogénesis de HDL naciente y la homeostasis lipídica. La actividad de ABC1 se integra con programas transcripcionales impulsados por LXR/RXR y se cruza con el manejo de lípidos en macrófagos, la remodelación de membranas y la señalización inflamatoria. La expresión o función desregulada de Abca1 altera el tráfico de colesterol, promueve la formación de células espumosas y se estudia ampliamente en el contexto de vías relevantes para la aterosclerosis y fenotipos de almacenamiento lipídico. En modelos murinos, Abca1 también se utiliza para investigar efectos dependientes de lípidos sobre la función de células inmunitarias, el metabolismo lipídico hepático y procesos neuroinflamatorios vinculados al transporte de colesterol.

ABC1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Abca1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ABC1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Abca1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Abca1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ABC1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Abca1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ABC1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ABC1 en células tumorales con expresión de Abca1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.