ABC1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-418929-ACT

Il gene murino Abca1 codifica per il trasportatore ABC (ATP-binding cassette) ABC1, un regolatore chiave dell’efflusso cellulare di colesterolo e fosfolipidi verso le apolipoproteine, sostenendo la biogenesi delle HDL nascenti e l’omeostasi lipidica. L’attività di ABC1 si integra con i programmi trascrizionali guidati da LXR/RXR e interseca la gestione dei lipidi nei macrofagi, il rimodellamento della membrana e la segnalazione infiammatoria. Un’espressione o una funzione disregolata di Abca1 altera il traffico del colesterolo, promuove la formazione di cellule schiumose ed è ampiamente studiata nel contesto di vie rilevanti per l’aterosclerosi e di fenotipi di accumulo lipidico. Nei modelli murini, Abca1 è utilizzato anche per indagare gli effetti lipidodipendenti sulla funzione delle cellule immunitarie, sul metabolismo lipidico epatico e su processi neuroinfiammatori legati al trasporto del colesterolo.

ABC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Abca1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ABC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Abca1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Abca1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ABC1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Abca1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ABC1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ABC1 nelle cellule tumorali con espressione di Abca1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.