Plasmide Double Nickase (h) AATM: sc-403969-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) AATM correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AATM Double Nickase (h) et le plasmide AATM Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GOT2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: AATM Antibody (E-7): sc-271702
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) AATM | sc-403969-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) AATM | sc-403969-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **GOT2** code l’aspartate aminotransférase mitochondriale (**AATM**), une enzyme dépendante du phosphate de pyridoxal qui catalyse la transamination réversible entre le couple glutamate/oxaloacétate et le couple α‑cétoglutarate/aspartate. Cette activité est au cœur de la navette malate‑aspartate, assurant le couplage de l’équilibre rédox entre cytosol et mitochondries tout en fournissant de l’aspartate à la biosynthèse des nucléotides et en soutenant des flux anaplérotiques vers le cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs). Par ces voies, l’AATM relie le métabolisme des acides aminés à la phosphorylation oxydative et aux programmes de prolifération cellulaire. Une dysrégulation de la fonction GOT2/AATM a été étudiée dans des contextes de reprogrammation métabolique et de dysfonction mitochondriale associés à la biologie du cancer et à d’autres troubles du métabolisme intermédiaire.
AATM Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GOT2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GOT2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GOT2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GOT2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.