AATM Plasmide Double Nickase (h): sc-403969-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AATM Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AATM Double Nickase Plasmid (h) e il AATM Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GOT2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AATM Antibody (E-7): sc-271702
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AATM Plasmide Double Nickase (h) | sc-403969-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AATM Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403969-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **GOT2** codifica l’aspartato aminotransferasi mitocondriale (AATM), un enzima dipendente dal fosfato di piridossale che catalizza la transaminazione reversibile tra glutammato/ossalacetato e α-chetoglutarato/aspartato. Questa attività è centrale nella navetta malato–aspartato, poiché collega l’equilibrio redox tra citosol e mitocondri, fornendo al contempo aspartato per la biosintesi dei nucleotidi e sostenendo il flusso anaplerotico nel ciclo dell’acido tricarbossilico (TCA). Attraverso queste vie, AATM mette in relazione il metabolismo degli amminoacidi con la fosforilazione ossidativa e con i programmi di proliferazione cellulare. Una funzione deregolata di GOT2/AATM è stata indagata in contesti di riprogrammazione metabolica e disfunzione mitocondriale associati alla biologia del cancro e ad altri disturbi del metabolismo intermedio.
AATM Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GOT2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GOT2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GOT2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GOT2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.