AATC Plasmide Double Nickase (h): sc-405477-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AATC Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AATC Double Nickase Plasmid (h) e il AATC Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GOT1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AATC Antibody (H-8): sc-515641
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AATC Plasmide Double Nickase (h) | sc-405477-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano GOT1 codifica l’aspartato aminotransferasi citosolica (AATC), un enzima dipendente dal fosfato di piridossale che catalizza la transaminazione reversibile tra aspartato e α-chetoglutarato, generando ossalacetato e glutammato. Questa attività collega il metabolismo degli amminoacidi alla navetta malato-aspartato, sostenendo l’equilibrio redox dell’NADH, l’anaplerosi e il flusso di carbonio nel ciclo dell’acido tricarbossilico (TCA). La funzione di GOT1 si integra con la gestione dell’azoto e con i pool di glutammato/aspartato, che influenzano i programmi biosintetici e le risposte cellulari allo stress. La disregolazione del “routing” metabolico associato a GOT1 è stata studiata in contesti di bioenergetica e omeostasi redox alterate, rilevanti per meccanismi di malattie proliferative e degenerative.
AATC Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GOT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GOT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GOT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GOT1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.