A-Raf Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401799

Panoramica

ARAF codifica A-Raf, una chinasi serina/treonina della famiglia RAF che collega il RAS attivato a livello della membrana plasmatica alla cascata di segnalazione MAPK/ERK. A-Raf partecipa alla regolazione della segnalazione mitogenica, della differenziazione e delle risposte allo stress attraverso il controllo della via RAF–MEK–ERK e l’interazione (crosstalk) con altri programmi di sopravvivenza e apoptosi. Sebbene BRAF e RAF1 siano più frequentemente implicati, una segnalazione RAF deregolata e un’alterata espressione o funzione di ARAF possono contribuire a un output aberrante della via, rilevante per la trasformazione oncogena e per decisioni di destino cellulare alterate. In quanto componente di un modulo centrale di trasduzione del segnale, A-Raf viene studiato in contesti quali la dinamica della segnalazione guidata da RAS, la regolazione tramite feedback e il rimodellamento (rewiring) della via in modelli cellulari rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO A-Raf (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ARAF in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ARAF insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ARAF a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina A-Raf.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ARAF per lo studio della segnalazione di A-Raf, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ARAF critici per la funzione di A-Raf
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ARAF per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal A-Raf CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal A-Raf CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ARAF. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal A-Raf Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR A-Raf (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ARAF per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ARAF definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.