Plásmido CRISPR de Activación (h) 4E-BP1: sc-400398-ACT

EIF4EBP1 codifica 4E-BP1, un represor sensible a la fosforilación de la traducción dependiente del cap que se une a EIF4E y limita el ensamblaje del complejo eIF4F. Como efector clave aguas abajo de la señalización PI3K–AKT–mTOR, 4E-BP1 integra señales de factores de crecimiento, nutrientes y estrés para ajustar la síntesis global de proteínas, el crecimiento celular y la adaptación metabólica. La fosforilación de 4E-BP1 mediada por mTORC1 libera EIF4E y promueve la traducción de transcritos implicados en proliferación y supervivencia, vinculando la regulación de EIF4EBP1 con la proteostasis y el control del ciclo celular. La actividad desregulada de 4E-BP1 y su estado de fosforilación se estudian con frecuencia en biología del cáncer, señalización metabólica y respuestas al estrés, contextos en los que la reprogramación de la traducción contribuye a fenotipos asociados a enfermedad.

4E-BP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EIF4EBP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

4E-BP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EIF4EBP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EIF4EBP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de 4E-BP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EIF4EBP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de 4E-BP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía 4E-BP1 en células tumorales con expresión de EIF4EBP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.