3β-HSD2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400991-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- 3β-HSD2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il 3β-HSD2 Double Nickase Plasmid (h) e il 3β-HSD2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HSD3B2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
3β-HSD2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400991-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
3β-HSD2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400991-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSD3B2 codifica la 3β-idrossisteroide deidrogenasi di tipo 2 umana (3β-HSD2), un enzima dipendente da NAD⁺ che catalizza la conversione ossidativa dei Δ5-3β-idrossisteroidi in Δ4-chetosteroidi, una tappa chiave della steroidogenesi. Questa attività sostiene la biosintesi surrenalica e gonadica di progesterone, androstenedione e di precursori correlati necessari per le vie dei glucocorticoidi, dei mineralcorticoidi e degli steroidi sessuali. La funzione della 3β-HSD2 è strettamente collegata alle reti steroidogeniche mitocondriali e del reticolo endoplasmatico e alla segnalazione di feedback endocrino. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di HSD3B2 sono state associate a errori congeniti della biosintesi degli steroidi e a fenotipi di squilibrio steroideo, rendendolo rilevante per studi meccanicistici della biologia surrenalica e riproduttiva.
3β-HSD2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HSD3B2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HSD3B2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HSD3B2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HSD3B2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.