Partículas Lentivirales de Activación (h) 14-3-3 ζ: sc-400490-LAC

YWHAZ codifica la proteína humana 14-3-3 zeta, un adaptador de unión a fosfoserina/fosfotreonina que regula la estabilidad, la localización y la actividad de diversos clientes proteicos. Mediante amplias interacciones proteína–proteína, 14-3-3 zeta integra la señalización a través de las vías PI3K/AKT, MAPK y de respuesta al estrés, influyendo en la progresión del ciclo celular, la apoptosis y la dinámica del citoesqueleto. Su conectividad en red vincula a YWHAZ con la proteostasis y el control de puntos de control dependiente de la fosforilación, lo que lo convierte en un foco frecuente en estudios de biología de sistemas sobre el reconfigurado de la señalización. La expresión desregulada de 14-3-3 zeta o el uso alterado de sus socios de unión se han asociado con programas modificados de proliferación y supervivencia en múltiples contextos relevantes para enfermedades, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en análisis de vías.

Las partículas de activación lentiviral 14-3-3 ζ (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de YWHAZ en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral 14-3-3 ζ (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción YWHAZ, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de 14-3-3 ζ. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo YWHAZ y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.