β-Amyloid Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400520-LAC

APP codifica la proteina precursore dell’amiloide, una glicoproteina transmembrana di tipo I che va incontro a un processamento sequenziale da parte delle secretasi α, β e γ, generando molteplici frammenti bioattivi, inclusi i peptidi β-amiloide. Il traffico di APP attraverso i sistemi secretorio ed endo-lisosomiale la collega al turnover di membrana, alla funzione sinaptica, alla crescita dei neuriti e all’adesione cellulare, mentre la scissione dipendente dalle secretasi connette la biologia di APP alla proteolisi intramembrana regolata. Il processamento amiloidogenico deregolato e l’alterata omeostasi di Aβ sono caratteristiche molecolari centrali studiate nella malattia di Alzheimer e nell’angiopatia amiloide cerebrale; inoltre, l’espressione di APP viene esaminata anche nel contesto delle risposte neuronali allo stress e della proteostasi. I modelli in vitro indagano frequentemente le interazioni della via di APP con il metabolismo del colesterolo, lo smistamento endosomiale, la funzione autofagia-lisosoma e la segnalazione infiammatoria nelle cellule gliali e neuronali.

Le particelle di attivazione lentivirale β-Amyloid (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di APP in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale β-Amyloid (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione APP, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di β-Amyloid. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo APP e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.