Plasmide Double Nickase (h) β1 Tubulin: sc-400113-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) β1 Tubulin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide β1 Tubulin Double Nickase (h) et le plasmide β1 Tubulin Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TUBB1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: β1 Tubulin Antibody (908G2X): sc-517652
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) β1 Tubulin | sc-400113-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) β1 Tubulin | sc-400113-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TUBB1 code la β1-tubuline humaine, un isotype de β-tubuline enrichi dans la lignée hématopoïétique, qui polymérise avec les α-tubulines pour former des microtubules essentiels à l’organisation du cytosquelette et au transport intracellulaire. Dans les mégacaryocytes et les plaquettes, la β1-tubuline soutient la formation des proplaquettes, les changements de forme des plaquettes et l’intégrité de l’anneau de microtubules, ce qui l’associe à la dynamique du cytosquelette, au trafic vésiculaire et aux processus de division cellulaire. Une perturbation de l’assemblage des microtubules ou de l’expression de la β1-tubuline peut altérer la mégacaryopoïèse et la biogenèse plaquettaire, et des variants de TUBB1 sont associés à des thrombopathies héréditaires ainsi qu’à des phénotypes de fonction plaquettaire modifiée. En tant que composant structural du réseau de microtubules, la β1-tubuline est également pertinente pour l’étude de l’organisation du fuseau mitotique, du remodelage du cytosquelette et des relations génotype–phénotype dans des modèles de maladies hématologiques.
β1 Tubulin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TUBB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TUBB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TUBB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TUBB1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.