α-tectorin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423331

Panoramica

Tecta codifica l’α-tectorina, una importante glicoproteina non collagenica della membrana tettoriale dell’orecchio interno, che contribuisce all’organizzazione della matrice extracellulare, all’accoppiamento biomeccanico e a un’efficiente trasduzione mechanoelettrica nelle cellule ciliate cocleari. Modellando le proprietà viscoelastiche e la microarchitettura della membrana tettoriale, l’α-tectorina sostiene la selettività in frequenza e la sensibilità ai suoni. Alterazioni di Tecta sono associate a fenotipi di disfunzione uditiva, rendendolo un bersaglio utile per studiare lo sviluppo dell’epitelio sensoriale e la segnalazione dipendente dalla matrice che regola la stimolazione delle cellule ciliate.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO α-tectorin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tecta in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tecta insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tecta a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina α-tectorin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tecta per lo studio della segnalazione di α-tectorin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tecta critici per la funzione di α-tectorin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tecta per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal α-tectorin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal α-tectorin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tecta. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal α-tectorin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR α-tectorin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tecta per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tecta definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.