Particules Lentivirales d'Activation (h) ZUFSP: sc-415124-LAC

ZUFSP (zinc finger with UFM1-specific peptidase domain) code une enzyme de déubiquitination qui régule l’homéostasie protéique via une activité protéase dirigée contre des modificateurs de type ubiquitine. La protéine ZUFSP a été associée au contrôle de la réponse aux dommages de l’ADN et au maintien du génome lors de la réplication, en modulant les signaux ubiquitine au niveau des fourches de réplication bloquées et des intermédiaires de réparation. Par son rôle dans la coordination de processus dépendants de l’ubiquitine, ZUFSP peut influencer des voies associées à la chromatine, la progression du cycle cellulaire et les réponses cellulaires au stress. Une signalisation ubiquitine dérégulée et une stabilité du génome altérée sont des caractéristiques récurrentes en biologie du cancer et dans la recherche sur les maladies neurodégénératives, ce qui fait de ZUFSP un nœud utile pour des études mécanistiques de la protéostasie et de la réparation de l’ADN.

Les particules d'activation lentivirales ZUFSP (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ZUFSP dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ZUFSP (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ZUFSP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ZUFSP. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ZUFSP ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.