Plasmide CRISPR d'Activation (h) ZP1: sc-403636-ACT

ZP1 (glycoprotéine 1 de la zone pellucide) code une protéine de la matrice extracellulaire qui constitue un composant structural central de la zone pellucide humaine, où elle favorise l’assemblage et la stabilisation du réseau de glycoprotéines entourant l’ovocyte. Cette matrice intervient dans des processus reproductifs clés, notamment la maturation ovocytaire, la liaison des spermatozoïdes et la prévention de la polyspermie, ce qui reflète une régulation coordonnée du trafic sécrétoire, de l’organisation de la matrice extracellulaire et des événements de signalisation associés à la fécondation. Une altération de la fonction de ZP1 est liée à une intégrité compromise de la zone pellucide et a été associée à des phénotypes d’infertilité féminine tels qu’un développement ovocytaire anormal et un échec de fécondation. En tant que gène à expression restreinte à une lignée et à un stade donnés, ZP1 est fréquemment utilisé comme marqueur pour étudier les programmes transcriptionnels spécifiques de l’ovocyte et la biologie de la matrice extracellulaire dans des modèles de recherche en reproduction.

ZP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.